实验方案

1、*低检测限确认

用鼻拭子样本提取液对3株不同来源具有代表性病毒株分别进行稀释，每个毒株分别稀释到L1（800 TCID50/mL）、L2（400 TCID50/mL）、L3（200 TCID50/mL）、L4（100 TCID50/mL），共计4个浓度梯度，每个60次测试结果，*后对每个样本的60次测试结果进行阳性检出率计算，达到>95%阳性检出率的浓度为本试剂盒的*低检测限。

3个病毒株×4个梯度×重复3份×20次测试×3个批次=2160

2、*低检测限验证

使用3株不同的具有时间和区域特征性的病毒株样本，使用客户要求的一种基质样本提取液进行稀释，稀释毒株浓度为*低检测限浓度水平，然后进行验证。每份样本重复检测20次，*后对每个样本的20次测试结果进行阳性检出率计算，应达到>95%阳性检出率。

3个病毒株（与实验1不同的三个病毒株）×20次测试×3个批次=180

3、 包容性——重复性

 使用具有时间和区域特征性的不同来源的10株不同的病毒株样本，样本应覆盖目前国内变异株的常见类型，使用客户要求的一种基质样本提取液进行稀释，稀释毒株浓度为2000 TCID50/mL(中/强阳)、和200 TCID50/mL（临界）两个水平的样本，然后进行验证。每份样本重复检测10次，200 TCID50/mL浓度病毒株检出率>95%，且检测线显色均一。2000 TCID50/mL检出率****，且检测线显色均一。

10×2个水平×10次测试×3个批次=600

4、 精密度

使用客户要求的一种基质提取液，将一株病毒株样本稀释为200 TCID50/mL（临界）和2000 TCID50/mL(中/强阳)。

在不同试验室由不同操作人员，分别利用三个批号试剂测试200 TCID50/mL和2000 TCID50/mL的两个浓度的样本，各水平样本每天进行2次测试（每次测试至少间隔2小时），每次测试重复2次，共测试20天，获得80个有效数据。200 TCID50/mL浓度病毒株检出率>95%，2000 TCID50/mL浓度病毒株检出率****。

2个水平×2次测试×重复2次×20天×3个批次=480

5、 Hook效应

用客户要求的一种基质样本提取液稀释高浓度样本的新型冠状病毒培养液，浓度分别为1.15×107TCID50/mL、1.15×106TCID50/mL、1.15×105 TCID50/mL、1.15×103 TCID50/mL。

采用三个批次试剂盒，每个浓度各测试三次。观察检测结果，判断阴阳性，未出现阴性结果的浓度*高点，即为产品不出现HOOK效应的*高浓度。

4个水平×3次测试×3个批次=36

6、干扰物

  用客户要求的一种基质样本提取液稀释新型冠状病毒培养液浓度为200 TCID50/mL，加入干拢物。

采用三个批次试剂盒，每个干扰物（《新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原检测试剂注册技术审评要点（试点）》要求的干扰物）测试。观察检测结果，判断阴阳性，结果应为阳性。

1个浓度水平×2次测试×27种干扰物×3批次=162

7、企业参考品建立

企业阳性参考品： 用客户要求的一种基质样本提取液稀释新型冠状病毒培养液浓度在800 TCID50/mL-1600 TCID50/mL之间，新型冠状病毒培养液应包含不同的变异毒株，如Alpha、Beta、Delta和Omicron等，命名：企业阳性参考品P1—P5，每个参考品重复3次测试。

5个参考品×3次测试×1个批次=15

企业阴性参考品：用客户要求的一种基质样本提取液稀释冠状病毒（HKU1、OC43、NL63、229E）、流感病毒（甲型 H1N1流感病毒，乙型流感病毒(Yamagata 系)）、肠道病毒（肠道病毒 A 组 CA16）、呼吸合胞病毒（呼吸道合胞病毒A）、腺病毒（腺病毒3型）以上病毒稀释后终浓度为105TCID50/mL，和1份正常临床样本，命名：企业阴性参考品N1—N10，每个参考品重复3次测试。

10个参考品×3次测试×1个批次=30

检测限参考品： 用客户要求的一种基质样本提取液稀释新型冠状病毒培养液浓度分别为100TCID50/mL、200TCID50/mL、400TCID50/mL。命名：检测限参考品L1—L3，每个参考品重复3次测试。

3个参考品×3次测试×1个批次=9

重复性参考品：用客户要求的一种基质样本提取液稀释新型冠状病毒培养液浓度分别为 200TCID50/mL 、2000TCID50/mL。命名：重复性参考品R1和R2，每个参考品重复10次测试。

2个参考品×10次测试×1个批次=20

8、企业参考品的验证

   采用三个批次试剂盒测试项目7的企业参考品，其中企业阳性参考品P1—P5各测试2次，结果应为阳性；企业阴性参考品N1—N10各测试2次，结果应为阴性；检测限参考品L1—L3各测试2次，结果L1应为阴性，L2、L3应为阳性；重复性参考品R1和R2各测试10次结果应为阳性。

（5个阳性×2次+10个阴性×2次+3个检测限×2次+2个重复性×10次）×3批=168（单批次56）

9、实时稳定性研究

使用企业参考品检测三个批号的试剂盒，检测方法见项目8。三批试剂盒各放在以下条件:室温（2—30℃），2℃，30℃中储存，在生产日期的第6月后进行检测。并记录结果。

（5个阳性×2次+10个阴性×2次+3个检测限×2次+2个重复性×10次）×3个条件×3批=504

10、 开封稳定性

使用企业参考品检测一个批号的试剂盒，试剂盒放在以下3个温湿条件（25度50%，40度50%，25度90%），开封30m,60m,90m,120m后测试企业参考品，并记录实验结果。

3个条件×4个开封时间×（5个阳性×1次+10个阴性×1次+3个检测限×1次+2个重复性×10次）=456

11、运输稳定性

使用企业参考品提供的一批经运输的试剂盒，测试企业参考品，并记录实验结果。

6个条件 ×（5个阳性×1次+10个阴性×1次+3个检测限×1次+2个重复性×10次）=228

试剂盒由公司提供，运输条件如下：

条件1

-20±2度，湿度不限，回来后跌落700mm

条件2

50±2度，湿度不限，回来后跌落700mm

条件3

标准温湿度23±2度  50±2%，回来后跌落700mm

条件4

条件5

条件6

12、交叉反应

用客户提供的样本提取液对交叉物分别进行稀释，终浓度为：病毒类≥105pfu/mL，细菌类≥106CFU/mL。用3个批次试剂盒对每个交叉物（《新型冠状病毒（2019-nCoV）抗原检测试剂注册技术审评要点（试行）》要求的交叉物（注：除轮状病毒和鼻病毒C组））测试2次。观察检测结果，判断阴阳性，结果应为阴性。

1个浓度水平×2次测试×46种交叉物×3批次=276

我们合作的技术中心有抗原检测试剂产品测试的能力，有需要做抗原试剂产品检测需求的企业，可以与我们联系。

联系人：邹工